种子质量的控制 种子质量是影响发酵生产水平的重要因素。种子质量的优劣,主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件两个方面。这就是说既要有优良的菌种,又要有良好的培养条件才能获得高质量的种子。影响孢子质量的因素及其控制:孢子质量与培养基、培养温度、湿度、培养时间、接种量等有关,这些因素相互联系、相互影响,因此必须全面考虑各种因素,认真加以控制。
一,培养基
构成孢子培养基的原材料,其产地、品种、加工方法和用量对孢子质量都有一定的影响。生产过程中孢子质量不稳定的现象,常常是原材料质量不稳定所造成的。原材料产地、品种和加工方法的不同,会导致培养基中微量元素和其他营养成分含量的变化。例如,由于生产蛋白胨所用的原材料及生产工艺的不同,蛋白胨的微量元素含量、磷含量、氨基酸组分有所不同,而这些不同牌号的琼脂含有不同的无机离子造成的。
此外,水质的影响也不能忽视,这是由于不同牌号的琼脂含有不同的无机离子造成为水质波动的原因。为了避免水质波动对孢子质量的影响,可在蒸馏水或无盐水中加入适量的无机盐,供配制培养基使用。例如在配置生产根瘤菌的斜面培养基时,有时在无盐水内加入0。02%mgso4,提高根瘤菌发酵产量。为了保证孢子培养基的质量,斜面培养基所用的主要原材料,糖、氮、磷含量需经过化学分析及摇瓶发酵试验合格后才能使用。制备培养基时要严格控制灭菌后培养基质量。斜面培养基使用前,需在适当温度下放置一定的时间,使斜面无冷凝水呈现,水分适中有利于孢子生产。
配制孢子培养基还应该考虑不同代谢类型的菌落对多种氨基酸的选择。菌种在固体培养基上课呈现多种不同代谢类型的菌落,各种氨基酸对菌落的表现不同。氮源品种越多,出现的菌落类型也越多,不利于生产的稳定。斜面培养基上用较多单一的氮源,可抑制某些不正常型菌落的出现;而对分离筛选的平板培养基则需加入较复杂的氮源,使其多种菌落类型充分表现,以利筛选。因此在制备固体培养基时有两天经验:
a.共生产用的孢子培养基或作为制备砂土孢子或传代所用的培养基要用比较单一的氮源,以便保持正常菌落类型的优势;
b.作为选种或分离用的平板培养基,则需采用较复杂的有机氮源,目的是便于选择特殊代谢的菌落。
二。培养温度和湿度
微生物在一个较宽的温度范围生长。但是,要获得高质量的孢子,其最适宜区间很狭窄。一般来说,提高培养温度,可使菌体代谢活动加快,缩短培养时间,但是,菌体的糖代谢和氮代谢的各种酶类,对温度的敏感性是不同的。因此,培养温度不同,菌的生理状态也不同,如果不是用最适宜培养的孢子,其生产能力就会下降。不同的菌株要求的最适宜温度不同,需经实践考察确定。例如,龟裂链霉菌斜面最适温度为36。5~37度,如果高于37度,则孢子成熟早、易老化,接入发酵罐后,就会出现菌丝对糖、氮利用缓慢,氨基酸回升提前,发酵产量降低等现象。培养温度控制地一些,则有利于孢子的形成。龟裂链霉菌斜面先放在36。5度培养3d,在放在25。5度培养1d,所得的孢子数量比在36。5培养4d所得的孢子数量增加3~7倍。