接种量 制备孢子时的接种量要适中,接种量过大或过小均对孢子质量产生影响。因为接种量的大小影响在一定量培养基中孢子的个体数量的多少,进而影响菌体的生理状态。凡接种后菌落均匀分布整个斜面,隐约可分菌落者为正常接种。接种量过小则斜面上长出的菌落稀疏,接种量过大则斜面上菌落密集一片。一般传代用的斜面孢子要求菌落分布较密,孢子数达到要求标准。一般一支高度为20cm、直径为3cm的试管斜面,丝状菌孢子数要求达到10的7个平方以上.
除了以上几个因素需加以控制之外,要获得高质量的孢子,还需要对菌种质量加以空盒子。用各种方法保存的菌种每过1年都要进行1次自然分离,从中选出形态、生产性能好的单菌落接种孢子培养基。制备好的斜面孢子,要经过摇瓶发酵试验,合格后才能用于发酵生产。
种子质量标准 不同产品、不同菌种以及不同工艺条件的种子质量有所不同,况且,判断种子质量的优劣尚且需要有丰富的实践经验。发酵工业生产上常用的种子质量标准,大致有如下几个方面:
A.细胞或菌体:种子培养的目的是获得健壮和足够的数量的菌体。因此,菌体形态、菌体浓度以及培养液的外观,是种子质量的重要指标。菌体形态可通过显微镜观察来确定,以单细胞菌体为种子的质量要求是菌体健壮、菌体抑制、均匀整齐,有的还要求有一定的排雷或形态。以霉菌、放线菌为种子的质量要求是菌丝粗壮,对某些燃料着色力强、生长旺盛、沉淀法、光密度发和细胞计数法等进行测定。种子液外观颜色、粘度等也可作为种子质量的粗略指标。
B.生化指标:种子液的糖、氮、磷含量的变化和ph值变化是菌体生长繁殖、物质代谢的反应,不少产品的种子液质量是以这些物质的利用情况及变化为指标。
C.产物生产量:种子液中产物的生产量是多种发酵产品发酵中考察种子质量的重要指标,因此液中产物生产量的多少是种子生产能力和成熟程度的反映。
D.酶活力:测定种子液中某种酶的活力,作为种子质量的标准,是一种较新的方法。如土霉素生产的种子液中淀粉酶活力与土霉素发酵单位有一定的赶圩,因此种子液定分酶活力可作为判断该种子质量的依据。此外,种子应确保无任何杂菌污染。