马铃薯试管苗工厂化快繁试验研究
2014-10-10   来源：   

    多年来，由于农民的自繁自育自留种，使得马铃薯在生产过程中产量逐年下降，品质变劣，商品形状变差等，经科学家研究证明，病毒的侵染及其在薯块内积累是马铃薯“退化”的主要原因。为了解决我市马铃薯主栽品种严重退化，产量降低这一问题，我所将马铃薯脱毒生产作为重点试验课题，针对脱毒生产中存在的问题进行了试验研究，从而利用了资源，降低了生产成本，为马铃薯的增产与增收提供了科学的理论依据，有力的加快了我市马铃薯脱毒薯生产的现代化进程。

    1 试验概况

    1.1 试验材料 脱毒种苗由中国农科院蔬菜花卉所提供。品种以我市主栽品种克新1号、克新3号为主，少量引进克新13号、坝薯9号、坝薯10号，以及观察试验品种费乌瑞它、大西洋等。

    1.2 试验地点 试验设在市农科所植物组培与工厂化育苗车间，内配备有空调，可调节温度的变化。

    1.3 试验日期 2004年3月购进脱毒苗，5月实验室仪器购回后开始少批量扩转，7月底进行大批量生产。

    2 试验方法

    该试验生产的工艺流程是：培养基配置?装瓶?灭菌?转接?培养。

    2.1 培养基的配置 马铃薯试管苗所需的培养基MS培养基，该培养基的特点是无机盐和离子的浓度高，是较稳定的离子平衡溶液，其营养的数量和比例能满足植物细胞的营养和生理需要。（1）MS培养基配方：包括大量元素、微量元素、铁盐、有机物、其他（琼脂、糖、灭菌水）；（2）母液配制：为使各种配料称取方便准确，减少误差及烦琐，一般将各种试剂扩大100倍，称取后配成母液，备用。每次配制培养基时，只需量取母液10ml/L制作培养基。（3）培养基pH调节：各种配料配好后，用pH试纸或pH仪测pH值，马铃薯试管苗所需的pH为5.8～6，再将琼脂加热至完全溶化即可。

    2.2 装瓶 将培养基装入7×7×10cm的方体四旋口无色玻璃瓶，注意不要把培养基粘附到培养瓶口，一般装培养基的量应以能扶起每一茎段即可，装好后用透气的封口膜封口。

    2.3 灭菌 灭菌采用高压蒸汽灭菌锅，温度调控在121℃（正负误差1℃），时间定为18～20分钟。灭菌后缓慢放气至常压，或者自然冷却，打开锅盖将灭好菌的培养瓶放在工作台上冷却待用。

    2.4 转接 在接种室的超净工作台上进行，转接材料为引进的脱毒原原种，转接工具有剪刀、镊子、酒精灯、75%酒精等，完全按照无菌操作程序进行。转接时首先将种苗材料截成8～10mm长，带有1～2个腋芽的茎段，将茎段按植株原有的上下方向（一定要上下分清），垂直插于灭菌的培养瓶内培养基面上，注意叶基的芽眼部位不能插入培养基内。每瓶可均匀插入新茎段15～25个，以20株最好，有利于瓶的空间利用和种苗生长，插好后用原封口膜封好，并标明品种名称、转接日期、转接人等，在档案记录本上记载好原始档案。

    2.5 培养 培养所需的条件是：温度一般为20～25℃，光照用日光灯做光源，每层培养架在距架面上30cm处安装40w日光灯2个，达到2000lx的光照强度，基本满足马铃薯脱毒苗的生长需求。

    3 试验结论与分析

    3.1 生长情况 试验材料在超净工作台转接后，据观察，在18～20℃、2000lx光照、密闭无菌条件时，顶芽2天后开始生长，3天开始生根，22～25天可长到5～6片叶、6～7cm高即可成株。用茎段转接后，3天开始生长，5天开始生根，25～30天即可成株。且在18～20℃时，苗壮叶大。在 25℃左右时，一般2天开始发芽，3天开始生根，20天即可成株，苗细弱，叶小。在28～30℃时，转接后一天芽开始生根，根少，且难成苗，多畸形。茎干变粗，顶芽坏死，无叶，生须根。观察结论：试管苗在20℃左右培养时成苗率高。

    3.2 污染情况 据统计分析，试管苗生产中的前期扩转和冬季的生产，污染率为4.4%～5.7%左右，而中期8～9月高温季节，污染率提高为15%左右，且多为细菌性污染。结论是；马铃薯试管苗的生产时期需避过高温季节。